Процесс выглядит, как все в молекулярной биологии - переносишь капли прозрачной жидкости из пробирки в пробирки, надеясь, что из этого что-то получится.Jumbo Jet wrote: 28 Jul 2021 21:19А как сам процесс выглядит? Мне интересно на уровне "беру ген" - где берёте? Из чего лепите? Как вы его в РНК или ДНК вставляете?bulochka wrote: 28 Jul 2021 20:27 вставляла нужные мне гены в вирусную ДНК или РНК, запускала ДНК или РНК в клетки, чтобы получить вирусы в оболочке, потом инфицировала ими клетки, выделяла и концентрировала вирусы, детектировала их путем ПЦР и т.п.
Где найти книшку "Верусалогия для даммис"?
Но в целом дело обстоит так. Лет так 15 назад я клонировала кодирующую последовательность одного человеческого белка (то есть сделала копию его матричной РНК). Обычно гены находятся в хромосомах, а хромосомы - в ядре клетки, типа толстой книги с инструкциями для изготовления всех частей клетки. Ну а с каждого гена в клетке делается рабочая инструкция-копия, в виде матричной РНК. Вот ее я клонировала, чтобы иметь матрицу для изготовления нужного мне белка. Клонировала - это имеется в виду, (1) купила у компании набор копий матричных РНК, изготовленный из определенной ткани (в моем случае, это был набор матричных РНК из клеток почек), (2) сдизайнила праймеры (короткие куски ДНК), которые узнают последовательность нужного мне гена, (3) заказала праймеры у компании, которая изготавливает праймеры из отдельных нуклеотидов, (4) поставила реакцию RT-PCR, объединив в пробирке РНК, праймеры, нуклеотиды и ферменты-полимеразы, которые делают копии РНК и ДНК, (5) взяла полученный кусок ДНК и вставила в так называемый вектор - кусок ДНК, который можно растить в бактериях и делать много его копий таким образом. Другие нужные мне гены я получила у других людей (моих коллег), они были изготовлены примерно таким же образом.
Дальше, когда я начала заведовать своей лабораторией, мне нужно было найти способ, как заставить клетки почек (в пробирке) производить копии этих белков (потому что мы изучаем генетические болезни почек, и мне нужно смотреть, как генетические варианты/мутации влияют на работу белков в соответствующих клетках). Оказалось, что для этого нужны вирусы, так что я стала работать с адено-, ретро- и лентивирусами. Там процесс примерно такой же - покупаешь или берешь у коллег вирусный вектор (то есть кусок ДНК), вставляешь в него копию имеющегося у тебя в бактериальном векторе гена (могу объяснить процесс вставки, если нужно), проверяешь, что все сделано правильно (обычно путем определения последовательности ДНК в векторе - когда-то я это делала сама, но теперь это уже давно аутсорсится компаниям, которые занимаются секвенированием), ну и дальше пакуешь вектор в нужную оболочку, обычно с помощью так называемых packaging cells (это клетки, в которых уже есть фрагменты вирусного генома, кодирующие упаковочные белки/белки оболочки). Дальше растишь много-много клеток, замораживаешь, размораживаешь (чтобы заставить клетки лопнуть), избавляешься от обломков клеток и получаешь вирус.
Насколько я понимаю, аденовирусные векторы для вакцин как раз примерно так и делаются. А РНКовые вакцины, по-моему, попроще - если ничего не путаю, там делают ДНКовую матрицу, потом с нее прямо в пробирке делают РНК, и дальше эту РНК смешивают с липидами (когда-то я читала о том, как именно это смешивание происходит, но сейчас уже забыла технические детали). Основная сложность, конечно, это масштабы процесса, ну и изначальный дизайн РНК и липидной оболочки, который сделал возможным сделать РНК относительно стабильной.
Причем навсегда.. более 8 процентов населения добавилось за черту бедности. Миллионы людей потеряли работу. Однако мудаки типа Гейтса.. Безоса.. Цукерберга и прочие гандоны вместе заработали ТРИЛЛИОН долларов. И эти твари продолжают закрывать рот всем, кто выступает против них. Первая поправка к Конституции уже давно послана нахер этими мудаками. Всем правит большое бабло. Пфайзер уже получило (получит) 33 миллиарда на вакцинах.. впереди очередная волна вакцинации - третья. А как же.. теперь будут колоть каждые полгода, это золотая жила просто.